一。試驗(yàn)內(nèi)容：

（一）抗腫瘤作用（增加協(xié)同抗腫瘤作用）

1。采用CCK-8法觀察不同加工工藝靈芝孢子粉產(chǎn)品對L1210（小鼠急性淋巴白血病細(xì)胞）、RM-1（小鼠前列腺癌細(xì)胞）、LA798（小鼠肺腺癌細(xì)胞）等三個(gè)細(xì)胞株的體外增殖抑制作用，并計(jì)算出IC50；

2。測定不同加工工藝靈芝孢子粉產(chǎn)品LD50（預(yù)試驗(yàn)+正式實(shí)驗(yàn)）：LD50與腫瘤細(xì)胞無關(guān)，是驗(yàn)證藥物毒性大小的一個(gè)實(shí)驗(yàn)，又稱急性毒性實(shí)驗(yàn)。預(yù)試驗(yàn)用于測定初步劑量范圍，正式實(shí)驗(yàn)則是在預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上設(shè)定多個(gè)劑量，通過實(shí)驗(yàn)找到使半數(shù)動(dòng)物死亡的藥物劑量，為后面藥效實(shí)驗(yàn)（整體實(shí)驗(yàn)）設(shè)定合適的藥物劑量分組提供依據(jù)；（LD50暫時(shí)先不做，劑量按照每天人體口服劑量分為高、中、低劑量組，分別為高劑量組16g/天、中劑量組8g/天、低劑量組2g/天。）

3。根據(jù)上述試驗(yàn)的結(jié)果，來決定整體實(shí)驗(yàn)是做： L1210小鼠白血病的移植模型， 或是做RM-1小鼠前列腺癌， 或是做LA798小鼠肺腺癌的移植模型。

建立L1210，或是RM-1，或是LA798的移植模型，只做上述三種中的一種（調(diào)整濃度至1×107個(gè)/ml，每只DBA/2小鼠腹腔注射細(xì)胞懸液0.1ml），分組：分為正常對照組，荷瘤對照組，陽性藥對照組，樣品大劑量組，樣品中劑量組，樣品小劑量組共6組，灌胃給藥15天，觀察不同加工工藝靈芝孢子粉產(chǎn)品對荷瘤小鼠生命的延長率的影響，并繪制生存曲線。（給藥方式改為注射和灌胃兩種方式）

4。在建立上述移植模型基礎(chǔ)上，同上分組，灌胃給藥15天后，取小鼠脾臟，分離淋巴細(xì)胞，再以LPS或ConA刺激，培養(yǎng)48小時(shí)后，加入CCK-8，檢測淋巴細(xì)胞增殖活力。

5。在建立上述移植模型基礎(chǔ)上，同上分組，定期計(jì)數(shù)各組小鼠外周白細(xì)胞數(shù)量及觀察細(xì)胞形態(tài)改變，取小鼠的肝、脾、肺、腎等臟器稱重并制作病理切片。

（二）升高白細(xì)胞作用

1。建立白細(xì)胞低下小鼠模型

環(huán)磷酰胺為周期非特異性抗腫瘤藥物，它能與發(fā)生烷化反應(yīng)，抑制的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄，也能導(dǎo)致基因錯(cuò)碼，或引起鏈的斷裂，損害功能與結(jié)構(gòu)，甚至引起細(xì)胞死亡。環(huán)磷酰胺對造血系統(tǒng)的損傷主要以粒細(xì)胞減少為主，同時(shí)骨髓有核細(xì)胞的數(shù)量與增殖速度均下降，這些都與臨床化療患者的癥狀十分相似。因此，采用腹腔注射環(huán)磷酰胺方法復(fù)制的骨髓抑制模型，能很好的模擬臨床惡性腫瘤患者化療后出現(xiàn)的骨髓抑制狀態(tài)。

C57小鼠，雄性， 20-22g，10只。連續(xù)腹腔注射環(huán)磷酰胺 50mg/kg，連續(xù)3天。第4天，取小鼠靜脈血，檢測白細(xì)胞數(shù)量及白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)（中性桿狀核粒細(xì)胞、中性分葉核粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞）。

2。不同加工工藝靈芝孢子粉產(chǎn)品對小鼠的升白細(xì)胞作用。

C57小鼠，雄性，20-22g，將動(dòng)物分組，每組10只：對照組、模型組、陽性對照組和給藥組。各組動(dòng)物腹腔給藥14天，正常組和模型組給予自來水。給藥第9天，除正常對照組外，各組均腹腔注射環(huán)磷酰胺50mg/kg，連續(xù)3天。末次給環(huán)磷酰胺后第3天，各組動(dòng)物尾尖取血20μl，加入血液稀釋液，檢測白細(xì)胞數(shù)量及白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)（中性桿狀核粒細(xì)胞、中性分葉核粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞）。

二。試驗(yàn)要求：

試驗(yàn)樣品：

1）第一批實(shí)驗(yàn)：CCK-8試驗(yàn)樣品和LD50（和預(yù)試驗(yàn)）樣品各3.0g（以有效成分的重量計(jì)）。

2）第二批實(shí)驗(yàn)：需提供樣品10.0g。

3）第三批實(shí)驗(yàn)：需提供樣品10.0g。

三。試驗(yàn)經(jīng)費(fèi)：

1。離體實(shí)驗(yàn)，每個(gè)樣品1.5萬，5個(gè)樣品共計(jì)7.5萬；

2.LD50實(shí)驗(yàn)，每個(gè)樣品1.0萬，5個(gè)樣品，共計(jì)5萬；

3。抗腫瘤整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，每個(gè)樣品3.5萬，5個(gè)樣品，共計(jì)17.5萬；

4。升高白細(xì)胞動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，每個(gè)樣品3.5萬，5個(gè)樣品，共計(jì)17.5萬；

5。學(xué)校收管理費(fèi)：10萬

6。實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)共計(jì)：60.8萬 （60萬元）

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