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回答1
我們邀請臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師解答上述提問,您可以進行追問或是評價
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李航 主任醫(yī)師
北京大學(xué)第一醫(yī)院
三級甲等
皮膚性病科
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您好,手上也可以出現(xiàn)疣,但不一定是尖銳濕疣,但都跟乳頭瘤病毒有關(guān),子宮里的也是可以看到的。
2012-10-22 23:07
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回答2
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軒存旺 醫(yī)師
家庭醫(yī)生在線合作醫(yī)院
其他
全科
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您好:潛伏期3周到8個月,平均3個月,多見于性活躍的青、中年男女,發(fā)病高峰年齡為20-25歲,病程平均在3-5個月的男女患者,在性接觸后不久即發(fā)病,而病程平均12個月的男性患者,其性接觸者可不發(fā)病。多數(shù)患者一般無癥狀。損害大小及形狀不等??蓛H為數(shù)個,亦可為多數(shù)針頭樣大的損害:在陰肛部可長成大的腫瘤樣物,有壓迫感;有惡臭味;有時小的濕疣可出現(xiàn)陰部痛癢不適,病人可出現(xiàn)尿血和排尿困難;直腸內(nèi)尖銳濕疣可發(fā)生疼痛、便血,而直腸內(nèi)大的濕疣則可引起里急后重感。男性患者好發(fā)于包皮系帶、冠狀溝、包皮、尿道、陰莖、肛門周圍和陰囊。病初為淡紅或污紅色粟狀大小贅生物,性質(zhì)柔軟,頂端稍尖,逐漸長大或增多??砂l(fā)展成乳頭狀或囊狀,基底稍寬或有帶,表面有顆粒。在肛門部常增大,狀如菜花,表面濕潤或有出血,在顆粒間常積存有膿液,散發(fā)惡臭氣味,搔抓后可繼發(fā)感染。位于濕度較低干燥部位的生殖器疣,損害常小而呈扁平疣狀。位于濕熱濕潤部位的疣常表現(xiàn)為絲狀或乳頭瘤狀,易融合成大的團塊。有嚴重肝病的患者濕疣可增大。妊娠可使?jié)耩鄰?fù)發(fā)或生長加快。亞臨床感染是指臨床上肉眼不能辨認的病變,但用3%-5%醋酸液局部外涂或濕敷5-10分鐘可在HPV感染區(qū)域發(fā)白,即所謂“醋酸白現(xiàn)象”。HPV感染和腫瘤的發(fā)生:(一)HPV與皮膚腫瘤的發(fā)生有關(guān)它在皮膚癌和其他解剖部位的腫瘤似乎起決定作用。口腔良性贅生物和癌前病變,皮膚鱗狀細胞癌組織中可發(fā)現(xiàn)HPV-11、16、18型DNA,曾報道喉部HPV-6乳頭瘤惡變成喉癌,皮膚疣狀表皮發(fā)育不良(EV)是HPV潛在致癌作用的證據(jù),EV皮損中發(fā)現(xiàn)多種HPV型DNA,并在患者皮膚鱗狀細胞癌中檢出HPV-5、8、14、17及20型,皮膚鱗狀細胞癌似乎是由先已存在的病毒性損害惡變而來。(二)尖銳濕疣與肛門生殖器癌生殖器癌與HPV類型有一定的關(guān)系。利用DNA雜交技術(shù)發(fā)現(xiàn)生殖器癌組織中存在HPV-6、11、16、18型等。
2012-10-27 21:05
1.宮頸癌:根據(jù)HPV與宮頸癌的關(guān)系,可將其分為兩大類型:低危型主要指HPV-6、11型,高危型是指HPV-16、18型,Gissmann等觀察到在侵襲性宮頸癌中,有57.4%患者存在著HPV-16、18型,其他學(xué)者也有相同發(fā)現(xiàn)。還有人從侵襲性宮頸癌中分離出HPV-33和35型。
2.皮膚鱗狀細胞癌(SCC):HPV感染而發(fā)生的CA也可能是癌前損害,并可發(fā)展成肛門生殖器SCC,這表明HPV是女陰、陰莖及肛門生殖器SCC的重要因素。CA,巨大CA和疣狀SCC組成一個生殖器癌前病變和癌的損害病譜,有些部位生殖器癌病例在其周圍皮膚有CA存在,有時肉眼見為典型的CA,但組織學(xué)檢查中發(fā)現(xiàn)SCC的孤立病灶。
3.鮑溫樣丘疹?。撼R娪陉幥o、女陰或肛門周圍,曾在皮損內(nèi)發(fā)現(xiàn)HPV-16型DNA。實驗室檢查一、醋酸白試驗用3-5%醋酸外涂疣體2-5分鐘,病灶部位變白稍隆起,肛門病損可能需要15分鐘。本試驗的原理是蛋白質(zhì)與酸凝固變白的結(jié)果,HPV感染細胞產(chǎn)生的角蛋白與正常的未感染上皮細胞產(chǎn)生的不同,只有前者才能被醋酸脫色。醋酸白試驗檢測HPV的敏感性很高,它比常規(guī)檢測觀察組織學(xué)變化還好。但偶爾在上皮增厚或外傷擦破病例中出現(xiàn)假陽性、假陽性變白跡象顯得界限不清和不規(guī)則。美國CDC提示,醋酸白試驗并不是特異試驗,且假陽性較常見。二、免疫組織學(xué)檢查常用過氧化物酶抗過氧化物酶方法(即PAP),顯示濕疣內(nèi)的病毒蛋白,以證明疣損害中有病毒抗原。HPV蛋白陽性時,尖銳濕疣的淺表上皮細胞內(nèi)可出現(xiàn)淡紅色的弱陽性反應(yīng)。三、組織化學(xué)檢查取少量病損組織制成涂片,用特異抗人類乳頭瘤病毒的抗體作染色。如病損中有病毒抗原,則抗原抗體結(jié)合。在過氧化物酶抗過氧化物酶(PAP)方法中,核可被染成紅色。此法特異性強且較迅速,對診斷有幫助。四、病理檢查主要為角化不全,棘層高度肥厚,乳頭瘤樣增生,表皮突增厚,延長,其增生程度可似假性上皮瘤樣。刺細胞和基底細胞并有相當(dāng)數(shù)量的核分裂、頗似癌變。但細胞排列規(guī)則,且增生上皮和真皮之間界限清楚。其特點為粒層和刺層上部細胞有明顯的空泡形成。此種空泡細胞較正常大,胞漿著色淡、中央有大而圓,深嗜堿性的核。通常真皮水腫、毛細血管擴張以及周圍較致密的慢性炎性浸潤。Bushke-loewenstein巨大型尖銳濕疣,表皮極度向下生長,代替了其下面的組織、易與鱗狀細胞相混,故須多次活檢。若有緩慢發(fā)展之傾向,則為一種低度惡變的過程,即所謂疣狀癌。五、基因診斷迄今,HPV難于用傳統(tǒng)的病毒培養(yǎng)及血清學(xué)技術(shù)檢測,主要實驗診斷技術(shù)是核酸雜交。近年來發(fā)展的PCR方法具有特異、敏感、簡便、快速等優(yōu)點,為HPV檢測開辟了新途徑。(一)標(biāo)本的采集及處理1.標(biāo)本的采集和預(yù)處理:用刮板或生理鹽水浸潤的棉棒從陰道和宮頸外口取分泌物和細胞。在作細胞學(xué)檢查的同時,將標(biāo)本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中,用PBS離心(3000g,10min)洗滌2次,沉積細胞重懸于1mlPBS中,取0.5ml細胞懸液抽提DNA。
2.標(biāo)本核酸的提取:按1體積細胞懸液加10倍體積的細胞裂解液(10mmol/LTris-HCl,pH7.4,10mmol/LEDTA,150mmol/LNaCl,
0.4%SDS,
1.0mg/ml蛋白酶K)37℃下處理過夜;且等體積酚/氯仿(
1:1),氯仿/異戊醇
(24:1)各抽提2次;加1/10體積3mol/LNaAc(pH5.2)及2.5倍體積無水乙醇置-20℃2h或過夜沉淀DNA;加1體積乙醇洗滌1次;用60μl含RNA酶(100μg/ml)的TE液(10mmol/LTris-HCl,pH8.0,1.0mmol/LEDTA)溶解DNA,37℃溫育30min。(二)PCR擴增1.引物設(shè)計和合成:HPV基因組可分為早期區(qū)(E)和晚期區(qū)(L),每區(qū)含一系列開放讀碼框架(ORF)。序列分析表明,各型HPV的非編碼區(qū)及E1、E6、E7和L1區(qū)均有保守序列。Manos等從HPVL1區(qū)中選擇保守序列設(shè)計合成引物MY11和MY09見表1,該引物與HPV6、11、16、18及33型有互補序列,也可擴增其它型HPV。Manos等設(shè)計的HPVL1通用引物MY11:GCMCAGGGWCATAAYAATGGMY09:CGTCCMARRGGAWACTGATC表1HPV型MY11的第1個鹼基位置MY09的第1個鹼基位置PCR產(chǎn)物長度(bp)6672271704481167077155448166584703545118655870124543365396987448M=A+C,R=A+G,W=A+T,Y=C+T表2列述了Manos等設(shè)計的寡核苷酸探針。公用混合探針序列選自HPVL1區(qū)中另一保守序列,可與MY11和MY09引物產(chǎn)生的多種HPVL1PCR擴增產(chǎn)物雜交:型特異探針只與相應(yīng)HPV型有互補序列,用于檢出的HPV分型。表2Manos等設(shè)計的HPVL1PCR產(chǎn)物探針公用混合探針GP1CTGTTGTTGATACTACACGCAGTACGP2CTGTGGTAGATACCACWCGCAGTAC第一個鹼基位置HPV66771HPV116757HPV166631HPV186607HPV336588型特異探針探針HPV型序列基因位置MY12HPV6CATCCGTAACTACATCTTCCA6813—6833MY13HPV11TCTGTGTCTAAATCTGCTACA6800—6820MY14HPV16CATACACCTCCAGCACCTAA6926—6945MY74HPV18GGATGCTGCACCGGTCTGA6905—6922MY16HPV33CACACAAGTAACTAGCTACAG6628—6648H=A+C+T,R=A+G,W=A+T,Y=C+T2.PCR反應(yīng)試劑:TaqDNA聚合酶(2U/ml)、10mmol/LdNTP貯備液(dATP、dCTP、dGTP、dTTP各10mmol/L),10×PCR緩沖液(500mmolKCl、40mmol/LMgCl2、100mmol/LTris-HCl、pH8.5),100μmol/LMY11和MY09貯備液,滅菌的玻璃蒸餾器制備的蒸餾水。
3.PCR擴增方法和程序:以100μlPCR反應(yīng)液,用無菌0.5ml硅化塑料離心管為反應(yīng)管進行擴增反應(yīng)。
(1)實驗前配制預(yù)混反應(yīng)試劑并分裝。預(yù)混反應(yīng)試劑包括除標(biāo)本DNA外的其它各種PCR反應(yīng)試劑。每支反應(yīng)管中含有的PCR反應(yīng)試劑見表3。表3每支反應(yīng)管中的PCR反應(yīng)試劑反應(yīng)試劑體積(μl)終濃度10×PCR緩沖液101×PCR緩沖液dNTP貯備液2200μmol/L每種dNTPMY11貯備液0.5500μmol/LMY09貯備液0.5500μmol/LTaqDNA聚合酶0.52.5μ滅菌蒸餾水75.5總計90(2)各反應(yīng)管依次加入10μl標(biāo)本和90μl預(yù)混反應(yīng)試劑。
(3)加入80-100μl石蠟油,在臺式離心機上快速離心數(shù)秒鐘,使各反應(yīng)試劑收集于油層下。目前,PCR試劑已商品化,反應(yīng)體積為25μl。使用時只加入標(biāo)本DNA即可。
(4)將反應(yīng)管置PCR擴增儀上,循環(huán)參數(shù)為95℃30s,55℃40s,72℃50s循環(huán)35次,最后72℃延伸5min。
4.每次試驗應(yīng)設(shè)陽性及陰性對照。以載有HPV的重組質(zhì)粒(每反應(yīng)為100pg)或含有HPV的細胞系(如Caski、HeLa)DNA為陽性對照,以無HPV的人細胞系DNA為陰性對照。(三)擴增產(chǎn)物的檢測和分析1.凝膠電泳:擴增反應(yīng)結(jié)束后,取出反應(yīng)管,冷卻至室溫,取10μl擴增產(chǎn)物用5%-7%聚丙烯酰胺凝膠或1.5%瓊脂糖電泳,溴化乙錠染色,紫外分析儀下分析結(jié)果,分子量約為450bp處出現(xiàn)明顯的DNA帶。
2.核酸雜交:如果凝膠電泳無清楚的DNA或需確定DNA帶的特異性時,可用標(biāo)記的公用混合探針和(或)型特異探針作Southern吸印雜交、斑點雜交驗證。按照標(biāo)準方法制32PATP標(biāo)記的寡核苷酸探針,需達到約107cpm/pmol特異活性。雜交液中需含有2×106-5×106cpm探針/ml。在55℃緩慢振蕩下雜交2-3h,隨后于30-55℃下用洗滌液(2×SSC、
0.1%SDS)迅速沖洗雜交膜,除去多余探針。
然后進行洗膜,其條件依所用探針而異:公用混合探針,55℃洗膜10min;MY12、MY13及MY16探針,56-57℃下10min,并換液重洗1次;MY14及WD74探針,58-59℃下10min,亦換液重洗1次。用PCR方法檢測HPV比核酸雜交方法優(yōu)越。其敏感性高,GP-PCR方法以凝膠電泳直接分析結(jié)果,可檢出標(biāo)本中200個拷貝的HPVDNA,若以核酸雜交檢測PCR產(chǎn)物,敏感性提高,能檢出10個拷貝的HPVDNA。鑒于PCR技術(shù)的高度敏感性,以生殖道脫落細胞為檢材足以滿足試驗要求,避免了活檢取材、研磨組織繁雜操作。一般情況下,PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳,觀察產(chǎn)生的DNA可直接作出診斷。因此,PCR技術(shù)檢測HPV實驗周期短、簡便快速。
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