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流式細(xì)胞儀是一種用于對細(xì)胞進(jìn)行快速、多參數(shù)定量分析和分選的技術(shù)。利用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞增殖可按以下步驟進(jìn)行。 首先是樣本制備。從組織或細(xì)胞培養(yǎng)物中獲取細(xì)胞，將其制成單細(xì)胞懸液，確保細(xì)胞分散良好，避免細(xì)胞團(tuán)塊影響檢測結(jié)果。同時，根據(jù)實驗?zāi)康倪x擇合適的染料對細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。常用的標(biāo)記方法有以下幾種，一是通過核酸染料標(biāo)記法，利用能與DNA結(jié)合的熒光染料，如碘化丙啶（PI）等，不同增殖階段的細(xì)胞DNA含量不同，通過檢測熒光強(qiáng)度來分析細(xì)胞周期分布，從而了解細(xì)胞增殖情況；二是使用細(xì)胞增殖相關(guān)抗原標(biāo)記法，如Ki-67抗原，它在增殖細(xì)胞中表達(dá)，不表達(dá)于靜止期細(xì)胞，用熒光標(biāo)記的抗體與Ki-67結(jié)合，流式細(xì)胞儀檢測熒光信號即可區(qū)分增殖和非增殖細(xì)胞；三是采用羧基熒光素二乙酸鹽琥珀酰亞胺酯（CFSE）標(biāo)記法，CFSE能進(jìn)入細(xì)胞并與細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)結(jié)合，細(xì)胞每分裂一次，其熒光強(qiáng)度就會減半，通過檢測熒光強(qiáng)度的變化來分析細(xì)胞增殖代數(shù)。 然后進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測。將標(biāo)記好的細(xì)胞懸液注入流式細(xì)胞儀，儀器會使細(xì)胞排成單列通過檢測區(qū)域，激光束照射細(xì)胞，激發(fā)熒光染料發(fā)出熒光，同時檢測前向散射光、側(cè)向散射光以及熒光信號。最后是數(shù)據(jù)分析。使用專門的軟件對檢測得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，根據(jù)不同的標(biāo)記方法和實驗?zāi)康模L制細(xì)胞周期分布直方圖、細(xì)胞增殖曲線等，計算細(xì)胞增殖指數(shù)等相關(guān)參數(shù)，從而評估細(xì)胞的增殖情況。