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外周血淋巴細胞培養(yǎng)基通常由基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清、植物血凝素、抗生素、營養(yǎng)添加劑等組成。使用時需嚴格遵循操作程序，包括樣本采集、培養(yǎng)基準備、細胞培養(yǎng)、觀察與檢測等。 1. 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：提供細胞生長所需的基本營養(yǎng)物質(zhì)，如氨基酸、維生素等。常見的有 RPMI 1640 培養(yǎng)基。 2. 血清：為細胞提供生長因子和激素，如胎牛血清。 3. 植物血凝素：刺激淋巴細胞增殖，如刀豆蛋白 A。 4. 抗生素：防止細菌和真菌污染，如青霉素、鏈霉素。 5. 營養(yǎng)添加劑：補充細胞生長所需的特殊營養(yǎng)成分。 6. 樣本采集：一般通過靜脈采血獲取外周血樣本。 7. 培養(yǎng)基準備：按照一定比例將各成分混合均勻。 8. 細胞培養(yǎng)：將處理好的外周血樣本加入培養(yǎng)基中，置于適宜環(huán)境培養(yǎng)。 9. 觀察與檢測：定期觀察細胞生長狀態(tài)，進行相關(guān)檢測分析。 外周血淋巴細胞培養(yǎng)基的組成成分和操作程序?qū)τ诩毎囵B(yǎng)的成功至關(guān)重要，操作過程中要嚴格遵守?zé)o菌原則，確保實驗結(jié)果的準確性和可靠性。

一、培養(yǎng)基組成成份：RPMI1640、血清、肝素、PHA等。二、使用方法：在酒精燈旁直接把采集到的外周血0.2—0.4mL接種到每瓶培養(yǎng)基內(nèi)，注意搖勻，置37℃培養(yǎng)68或69小時，用7#針頭每瓶加2—3滴秋水仙素（20微克/毫升）搖勻，繼續(xù)培養(yǎng)3小時左右，即可制片。顯帶：先將玻片放在預(yù)溫至37℃的0.25％胰酶溶液中（PH＝7.2-7.4）消化1分左右，每次作用時間并不完全相同?？上仍囈粡埰?，再根據(jù)顯帶效果調(diào)整胰酶作用時間，再放在預(yù)溫至37℃的0.75％Nacl溶液中漂洗兩次，在預(yù)溫至37℃的Giemsa溶液中染色10分鐘，自來水沖洗干凈，用吹風(fēng)機吹干后，即可閱片。

操作程序：1．采血：用10:2肝素（10％）溫潤無菌注射器抽取外周血2ml（注意：消毒時需脫碘）。2．種血：將注射器搓捏，使血樣混勻，在無菌條件下，用7#針頭垂直種血28-32滴（一般成年男子28滴，成年女子30滴，兒童32滴左右）至外周血培養(yǎng)基內(nèi)。3．培養(yǎng)：將培養(yǎng)瓶放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)68-72小時，培養(yǎng)期間注意觀察培養(yǎng)液有無凝血、溶血或長菌的現(xiàn)象，可每天將培養(yǎng)液搖一搖，以便細胞可獲得充分的營養(yǎng)，一般情況下可不搖。4．制片：加秋：在培養(yǎng)完成前2-3小時，加入濃度為20ug/ml的秋水仙素2-3小滴（7#針頭豎滴）后，繼續(xù)培養(yǎng)2-3小時。離心：將培養(yǎng)液用吸管吸至離心管中（10ml離心管）2000轉(zhuǎn)/分×10分鐘，棄上清,留沉淀。低滲：加入已預(yù)溫至37℃的0.075mol/L氯hua鉀溶液約8ml，用吸管充分打勻，放入37℃水浴箱中，溫育30分鐘。預(yù)固定：向離心管中加入現(xiàn)配的預(yù)溫至37℃的甲醇、冰醋酸固定液（3:1）1ml左右，輕輕混勻，置室溫下5分鐘，2000轉(zhuǎn)/分×10分鐘，棄上清,留沉淀。固定：沿管壁緩慢加入現(xiàn)配的預(yù)溫至37℃的新配固定液約8ml，輕輕混勻，然后2000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘。加入固定液再次固定。棄上清，用固定液將沉淀調(diào)成細胞懸液（不宜太濃，一般加固定液至0.5ml）在冰片上滴片，每張片上滴2滴?？酒毫⒓捶湃?5℃烤箱中烤片3小時。