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PCR 檢測是一種在醫(yī)學領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的分子生物學技術(shù)，用于檢測和分析特定的核酸序列，包括 DNA 和 RNA。它具有高靈敏度、高特異性、快速等特點，在疾病診斷、病原體檢測、基因分型、遺傳疾病篩查等方面發(fā)揮著重要作用。 1. 原理：PCR 檢測基于 DNA 復(fù)制的原理，通過特定的引物與模板 DNA 結(jié)合，在酶的作用下進行多次循環(huán)擴增，使目標核酸片段數(shù)量呈指數(shù)級增加。 2. 應(yīng)用范圍：可用于病原體檢測，如新冠病毒、乙肝病毒等；也用于腫瘤基因檢測、遺傳病診斷等。 3. 優(yōu)勢：靈敏度高，能檢測到微量的核酸；特異性強，準確識別特定序列；快速高效，短時間內(nèi)獲得結(jié)果。 4. 操作流程：包括樣本采集、核酸提取、PCR 擴增、產(chǎn)物檢測與分析等步驟。 5. 注意事項：樣本質(zhì)量至關(guān)重要，操作需嚴格遵循規(guī)范，防止污染影響結(jié)果準確性。 PCR 檢測是現(xiàn)代醫(yī)學中一項重要的技術(shù)手段，為疾病的診斷和治療提供了有力的支持，但檢測過程需要專業(yè)人員嚴格操作和質(zhì)量控制，以確保結(jié)果的可靠性。

何謂pcr檢測　定量PCR（PolymeraseChainReaction）技術(shù)有廣義概念和狹義概念。廣義概念的定量PCR技術(shù)是指以外參或內(nèi)參為標準，通過對PCR終產(chǎn)物的分析或PCR過程的監(jiān)測，進行PCR起始模板量的定量?！　V義概念下的定量PCR技術(shù)可以分為五種類型：（1）外參法+終產(chǎn)物分析。所謂“外參法”是指樣本與陽性參照在兩個反應(yīng)容器內(nèi)反應(yīng)。這種類型沒有對樣本進行質(zhì)控監(jiān)測，易出現(xiàn)假陰假陽結(jié)果，沒有監(jiān)測擴增效率，定量不準。（2）內(nèi)參法+終產(chǎn)物分析。所謂“內(nèi)參法”是指樣本與陽性參照在一個反應(yīng)容器內(nèi)反應(yīng)。這種類型對樣本進行質(zhì)控監(jiān)測，排除假陰結(jié)果，但是定量不準。（3）外標法+過程監(jiān)測。這種類型監(jiān)測擴增效率，陽性樣本定量準，但是無法排除假陰結(jié)果。（4）內(nèi)參法+過程監(jiān)測。由于樣本與陽性參照在一個容器內(nèi)反應(yīng)，用同樣的Taq酶和反應(yīng)參與物，存在竟爭性抑制，起始模板量濃度高的反應(yīng)會抑制起始模板量濃度低的反應(yīng)，所以定量不準。（5）外標法+過程監(jiān)測+內(nèi)對照。這種類型監(jiān)測擴增效率，陽性樣本定量準，同時排除假陰結(jié)果。這種類型是應(yīng)該提倡的。PCR過程的監(jiān)測有多種檢測模式。最常用的有三種檢測模式：（1）RGreenI檢測模式。溫度循環(huán)為94—55—72°C三步法，只有引物，無探針，熒光染料鑲嵌在雙股螺旋鏈中間。通過對特定方向的強熒光檢測獲得信號，這種試劑檢測模式易產(chǎn)生非特異信號，且本底光較大。（2）解探針模式（Taqman）HydrolysisProbe。溫度循環(huán)為94—60°C二步法，不僅有引物，還有另外一個特異針對擴增模板的探針在引物對之間。在探針相鄰兩個堿基上分別結(jié)合兩個熒光染料，一個染料接受激發(fā)光得到的能量傳給了第二個染料，接受能量的第二個染料通過發(fā)射特征光子回到穩(wěn)定態(tài)。當Taq酶在60°C延伸擴增鏈時，遇到探針，利用Taq酶5`—3`外切酶活性將探針水解成單個堿基，單個堿基之間距離較遠，第一個染料的能量無法傳給第二個染料，只好通過發(fā)射特征光子回到穩(wěn)定態(tài)，通過對溶液中第一個染料的熒光檢測獲得信號。這種試劑檢測模式增加了檢測信號的特異性，但是由于利用了Taq酶5`—3`外切酶活性，一般試劑廠家只給Taq酶的聚合酶活性定標，沒有同時給Taq酶5`—3`外切酶活性定標，不同批號試劑之間會給定量帶來差異。另外對探針的熔點溫度（Tm）僅要求其高于60°C，這就使不同試劑盒之間的特異性參差不齊，而且無法做質(zhì)控檢測。（3）雜交探針（HybridizationProbes）模式。溫度循環(huán)為94—55—72°C三步法，有引物，二個特異針對擴增模板相鄰的探針在引物對之間，在一個探針3`堿基上結(jié)合一個熒光染料，在另一個探針5`堿基上結(jié)合第二個熒光染料。在55°C時，兩個探針都剛好接合在模板上，第一個染料接受激發(fā)光得到的能量傳給了第二個染料，接受能量的第二個染料通過發(fā)射特征光子回到穩(wěn)定態(tài)，通過對結(jié)合在擴增模板上雙探針中第二個染料的熒光檢測獲得信號。這種試劑檢測模式中熒光信號與特定雜交溫度相關(guān)，探針的濃度始終保持不變，因此可以在擴增后檢測熔解曲線作為信號的特異性質(zhì)控。另外這種試劑檢測模式可以用于點突變檢測?！　—M義概念的定量PCR技術(shù)（嚴格意義的定量PCR技術(shù)）是指用外標法（熒光雜交探針保證特異性）通過監(jiān)測PCR過程（監(jiān)測擴增效率）達到精確定量起始模板數(shù)的目的，同時以內(nèi)對照有效排除假陰性結(jié)果(擴增效率為零)。在國家沒有出臺陰陽判定標準時，所用PCR系統(tǒng)靈敏度最好達到一個拷貝（一個病毒）。從理論上說，只要有一個拷貝數(shù)，樣本就算陽性；一個拷貝數(shù)都沒有才算陰性。